Hacat細胞來源於一位62歲患有黑色素瘤男性的病竈外圍正常皮膚，是在體外培養後自然轉化的永生化的人角質細胞，也是第一株永生化的表皮細胞。Hacat細胞角蛋白、角化細胞交聯外膜蛋白、中間絲相關蛋自陽性，可用於人表皮細胞角化的研究。
Hacat 細胞培養註意要點
1. 消化時間長
Hacat細胞貼壁較緊，傳代時消化時間較長，可能需要5min或者更久，具體時間因胰酶濃度、效價、消化條件有所不同，第一次對該細胞進行消化時要摸索最佳時間。註意消化前一定要用PBS清洗細胞2-3次，鋪板時一定要均勻，因為HaCat成片生長，鋪板不勻會存在局部生長過密難以消化，生長稀疏部份容易消化過度的情況。
2. 不可過度生長
如果Hacat細胞長滿後沒有及時傳代，任其過度生長，可能造成不可逆轉的損傷，導致傳代後細胞碎片增多，細胞變形，不生長等情況。
3. 黑點較多
Hacat細胞的胞體內黑色顆粒較多，這是該細胞的特性。同時細胞外也有少量黑點，這些黑點是細胞碎片粘附在瓶底，當碎片較多時可在換液前用復溫的PBS輕輕潤洗。
4. 培養時存在漂浮細胞
少量漂浮細胞不影響細胞生長,漂浮細胞較多時可以透過換液清除。
5. 生長較慢
註意控制傳代密度不要過低，建議細胞密度到達80%時進行傳代。
Hacat 細胞傳代培養
1. 預熱完全培養基、胰酶和PBS；
2. 用PBS洗滌細胞2次。洗滌過程中註意動作輕柔。
3.加入胰酶，迅速鋪勻，確保其充分接觸細胞表面。
4. 顯微鏡下觀察消化情況，約70%~80%細胞收縮變圓後，輕拍培養容器外壁，使 細胞脫離培養容器底面。立即加入胰酶雙倍體積的完全培養基，輕搖培養容器，使培養基和胰酶迅速混勻，終止消化。
5.吸取細胞懸液，吹打培養容器底面數次，盡可能將細胞都吹打下來，將細胞懸液轉移至離心管中。
6. PBS洗滌培養容器1~2次，收集所有細胞懸液至離心管中。
7. 收集的所有細胞懸液250 g離心4 min。
8. 離心後去除上清。加入2 mL預熱的完全培養基，輕柔吹打細胞沈澱，充分吹散、混勻。
9. 將細胞按(2.5~4.0) ×10^4個活細胞/c㎡接種至適宜的培養容器內。
10. 「十字法」搖勻細胞，將培養容器放入細胞培養箱中。
Hacat 細胞凍存
1. 待細胞生長至可傳代的密度，即可準備凍存。
2. 消化細胞，取少量細胞懸液計數。細胞懸液經250 g離心4 min。
3. 離心後去除上清，用適量4℃預冷的凍存液重懸細胞。將細胞按比例或數量分裝至凍存管中。一般凍存密度為(1.0~2.0)×10^6個/mL。
註意：細胞長時間在非培養條件下放置會嚴重影響細胞的狀態。如離心後用凍存液重懸計數，請將細胞放置於4℃冰箱內，以減弱細胞代謝，較好的保持細胞狀態。
4. 如使用海星一步凍存液，凍存管直接豎直放入-80℃冰箱即可完成「一步」凍存。如使用程式凍存液，需將凍存管放入提前預冷的程式降溫盒後放入-80℃冰箱。
5. 24小時後可將凍存管轉移到液氮進行長期保存。
註意：細胞不可長期保存在-80℃冰箱中。建議24 h後盡快轉移至液氮中。
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